ADAR3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402742-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADAR3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADAR3 Double Nickase Plasmid (h) e il ADAR3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADARB2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ADAR3 Antibody (3.591): sc-73410
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADAR3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402742-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADAR3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402742-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADARB2 codifica ADAR3, un membro arricchito nel cervello della famiglia delle adenosina deaminasi che agiscono sull’RNA, che si lega all’RNA a doppio filamento ed è implicato nella regolazione della struttura dell’RNA e nel controllo genico post-trascrizionale. A differenza di ADAR1/ADAR2, che sono cataliticamente attive, ADAR3 è spesso descritta come inattiva per quanto riguarda l’editing, ma può modulare gli esiti dell’editing dell’RNA da A a I competendo per i substrati di dsRNA e influenzando la ricodifica dei trascritti dipendente dall’editing, lo splicing, la stabilità dell’RNA e la processazione dei miRNA. Attraverso questi meccanismi, ADAR3 si intreccia con lo sviluppo neuronale, i programmi di segnalazione sinaptica e le vie di sensing innato dell’RNA che rispondono al dsRNA endogeno. In letteratura, un’alterata espressione di ADARB2 è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici e a firme di editing dell’RNA deregolate osservate in contesti di malattie neurologiche.
ADAR3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADARB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADARB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADARB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADARB2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.