Plásmido CRISPR de Activación (m) ADAR1: sc-425147-ACT

El gen *Adar* de ratón codifica ADAR1, una adenosina desaminasa que actúa sobre ARN y cataliza la edición A‑a‑I en sustratos de ARN de doble cadena, remodelando el potencial codificante de los transcritos, el empalme (splicing) y la estructura del ARN. ADAR1 es un regulador clave de la detección inmunitaria innata al limitar la activación aberrante de sensores citosólicos de ARN como MDA5 y la señalización posterior del interferón de tipo I, manteniendo así la homeostasis del ARN. Mediante la edición de dsARN endógeno, ADAR1 influye en las respuestas antivirales, la hematopoyesis y programas transcripcionales asociados al estrés, y su desregulación se ha vinculado a fenotipos inflamatorios y a interacciones alteradas entre tumor e inmunidad en sistemas experimentales. Como resultado, *Adar* se estudia ampliamente en vías que gobiernan la vigilancia del ARN, la expresión de genes estimulados por interferón y la inmunidad intrínseca celular.

ADAR1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Adar sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ADAR1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Adar en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Adar, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ADAR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Adar y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ADAR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ADAR1 en células tumorales con expresión de Adar silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.