ADAR1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425147-ACT

Il gene murino *Adar* codifica ADAR1, una adenosina deaminasi che agisce sull’RNA e che catalizza l’editing A-to-I in substrati di RNA a doppio filamento, rimodellando il potenziale codificante dei trascritti, lo splicing e la struttura dell’RNA. ADAR1 è un regolatore chiave del riconoscimento immunitario innato, poiché limita l’attivazione aberrante di sensori citosolici dell’RNA come MDA5 e della segnalazione a valle dell’interferone di tipo I, mantenendo così l’omeostasi dell’RNA. Attraverso l’editing di dsRNA endogeno, ADAR1 influenza le risposte antivirali, l’ematopoiesi e programmi trascrizionali associati allo stress; la sua disregolazione è stata collegata, in sistemi sperimentali, a fenotipi infiammatori e a interazioni alterate tra tumore e sistema immunitario. Di conseguenza, *Adar* è ampiamente studiato nei pathway che governano la sorveglianza dell’RNA, l’espressione dei geni stimolati dall’interferone e l’immunità cellula-intrinseca.

ADAR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Adar senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ADAR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Adar nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Adar, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ADAR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Adar nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ADAR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ADAR1 nelle cellule tumorali con espressione di Adar silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.