ADAR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401611-ACT

ADAR (ADAR1) codifica un enzima di RNA editing che catalizza la deaminazione da adenosina a inosina (A→I) all’interno di RNA a doppio filamento, rimodellando le sequenze dei trascritti, i siti di splicing e la struttura dell’RNA. Attraverso l’editing di dsRNA endogeni, ADAR1 modula le vie di rilevamento dell’immunità innata, inclusa la soppressione di un’alterata segnalazione dell’interferone e la regolazione della sorveglianza dell’RNA citosolico. L’attività di ADAR1 influenza programmi di regolazione genica post-trascrizionale che incidono sulle transizioni di stato cellulare, sulle risposte allo stress e sulle interazioni tumore–sistema immunitario. Un RNA editing disregolato e una funzione di ADAR1 perturbata sono stati associati a interferonopatie e a fenotipi rilevanti per il cancro, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici sul processamento dell’RNA e sulla regolazione immunitaria.

ADAR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADAR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ADAR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADAR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADAR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ADAR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADAR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ADAR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ADAR1 nelle cellule tumorali con espressione di ADAR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.