ADAM23 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403703-ACT

ADAM23 codifica una proteina contenente domini disintegrina e metalloproteasi che funziona principalmente come molecola di adesione e segnalazione sulla superficie cellulare, cataliticamente inattiva. Nei tessuti umani, ADAM23 partecipa alle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice ed è stato collegato alla regolazione dello sviluppo neuronale, dell’organizzazione sinaptica e della migrazione cellulare tramite interazioni con ligandi extracellulari e vie associate alle integrine. Alterazioni dell’espressione di ADAM23 e della sua regolazione epigenetica sono state riportate in diversi contesti patologici, inclusi disturbi neurologici e cancro, in cui sono rilevanti cambiamenti nella segnalazione mediata dall’adesione e nel comportamento invasivo. In quanto regolatore associato alla membrana della comunicazione intercellulare, ADAM23 rappresenta un utile punto di accesso per comprendere come i segnali extracellulari plasmino i programmi di segnalazione intracellulari.

ADAM23 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADAM23 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ADAM23 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADAM23 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADAM23, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ADAM23. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADAM23 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ADAM23 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ADAM23 nelle cellule tumorali con espressione di ADAM23 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.