ACTR-IIB Plasmide Double Nickase (m): sc-418977-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ACTR-IIB Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ACTR-IIB Double Nickase Plasmid (m) e il ACTR-IIB Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Acvr2b. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ACTR-IIB Antibody (G-7): sc-376593
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ACTR-IIB Plasmide Double Nickase (m) | sc-418977-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACTR-IIB Plasmide Double Nickase (m2) | sc-418977-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Acvr2b codifica il recettore dell’activina di tipo IIB (ACTR-IIB), una chinasi transmembrana serina/treonina che lega ligandi della superfamiglia del TGF-β quali miostatina (GDF8), activine e fattori di crescita correlati. In seguito al legame con il ligando, ACTR-IIB forma complessi di segnalazione con recettori di tipo I per attivare programmi trascrizionali dipendenti da SMAD2/3 che regolano la massa del muscolo scheletrico, la biologia del tessuto adiposo, la fibrosi e la differenziazione cellulare. Nei sistemi murini, la segnalazione di Acvr2b è ampiamente utilizzata per studiare il controllo della crescita e il rimodellamento dei tessuti lungo le vie muscolari e metaboliche, nonché risposte infiammatorie e della matrice extracellulare dipendenti dal contesto. Un’attività deregolata della via di ACTR-IIB è stata associata a fenotipi di deperimento muscolare e ad alterazioni dell’omeostasi energetica, rendendola un nodo rilevante per studi meccanicistici in modelli di malattie neuromuscolari e metaboliche.
ACTR-IIB Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Acvr2b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Acvr2b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Acvr2b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Acvr2b interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.