ACTG1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418967

Panoramica

Actg1 codifica la γ-actina citoplasmatica (ACTG1), un’isoforma dell’actina altamente conservata che polimerizza in microfilamenti per sostenere la forma cellulare, l’adesione e l’integrità meccanica. Le dinamiche di ACTG1 coordinano il rimodellamento dell’actina con processi quali la citocinesi, la migrazione cellulare e il traffico vescicolare, e si integrano con vie di segnalazione che regolano il turnover del citoscheletro, incluse le reti dipendenti dalle GTPasi della famiglia Rho. Nelle cellule di topo, Actg1 contribuisce alla morfogenesi dei tessuti e al mantenimento dell’architettura epiteliale e mesenchimale modulando la tensione corticale e l’organizzazione actomiosinica. L’omeostasi dell’actina deregolata e le alterazioni della funzione di ACTG1 sono rilevanti per studi su fenotipi dello sviluppo, meccanotrasduzione e disfunzioni del citoscheletro associate a malattie che influenzano la motilità cellulare e le proprietà di barriera.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTG1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Actg1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Actg1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Actg1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACTG1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Actg1 per lo studio della segnalazione di ACTG1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Actg1 critici per la funzione di ACTG1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Actg1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACTG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACTG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Actg1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACTG1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACTG1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Actg1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Actg1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.