ACTA1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418964

Panoramica

Acta1 codifica ACTA1, la principale isoforma di α-actina sarcomerica nel muscolo scheletrico, dove polimerizza in filamenti sottili che si ancorano ai dischi Z e consentono la contrazione basata su actomiosina. ACTA1 integra l’organizzazione strutturale del citoscheletro con la segnalazione contrattile regolata dal calcio, supportando la miofibrillogenesi, il mantenimento del sarcomero e la trasmissione della forza meccanica. Un’alterazione della funzione di ACTA1 compromette l’integrità e la contrattilità delle fibre muscolari ed è associata a miopatie congenite, rendendola un nodo centrale per lo studio dei difetti di assemblaggio del sarcomero e dei meccanismi di degenerazione muscolare in vivo e in vitro. Nei sistemi murini, Acta1 funge da marcatore chiave e da determinante funzionale della differenziazione del muscolo scheletrico, del rimodellamento del tipo di fibra e delle risposte allo stress da carico meccanico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTA1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acta1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acta1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acta1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACTA1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acta1 per lo studio della segnalazione di ACTA1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Acta1 critici per la funzione di ACTA1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acta1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACTA1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACTA1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acta1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACTA1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACTA1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acta1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acta1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.