Acrosin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418952

Panoramica

Il gene Acr del topo codifica l’acrosina, una proteasi a serina di tipo tripsina immagazzinata nell’acrosoma degli spermatozoi sotto forma di zimogeno, la proacrosina, e attivata durante la reazione acrosomiale. L’acrosina contribuisce al rimodellamento proteolitico a livello della testa dello spermatozoo e favorisce la penetrazione della zona pellucida, integrandosi con i processi che regolano la capacitazione spermatica, l’esocitosi acrosomiale e le interazioni tra le membrane dei gameti. Alterazioni dell’attività dell’acrosina sono associate a difetti della competenza fecondante e costituiscono un punto di accesso meccanicistico per lo studio della biologia riproduttiva maschile. Nell’ambito della più ampia rete delle proteasi a serina, l’acrosina rappresenta un modello di attivazione regolata degli zimogeni e di proteolisi associata alla matrice extracellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Acrosin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acr in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acr insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acr a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Acrosin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acr per lo studio della segnalazione di Acrosin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Acr critici per la funzione di Acrosin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acr per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Acrosin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Acrosin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acr. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Acrosin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Acrosin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acr per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acr definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.