Acid Ceramidase Plasmide Double Nickase (h): sc-401495-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Acid Ceramidase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Acid Ceramidase Double Nickase Plasmid (h) e il Acid Ceramidase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ASAH1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Acid Ceramidase Antibody (23): sc-136275
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Acid Ceramidase Plasmide Double Nickase (h) | sc-401495-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Acid Ceramidase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401495-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ASAH1 codifica la ceramidasi acida, un’idrolasi lisosomiale che scinde la ceramide in sfingosina e acido grasso libero, collegando il catabolismo degli sfingolipidi alla segnalazione mediata dalla sfingosina-1-fosfato. Regolando il reostato ceramide–sfingosina, la ceramidasi acida influenza il turnover di membrana, l’omeostasi lisosomiale, l’autofagia e le vie di risposta allo stress che modellano la sopravvivenza cellulare e la segnalazione infiammatoria. Un’attività di ASAH1 deregolata altera l’equilibrio degli sfingolipidi ed è stata associata a patologie da accumulo lisosomiale e a fenotipi neurodegenerativi, oltre che a una segnalazione lipidica alterata in modelli di cancro e di stress metabolico. ASAH1 è pertanto ampiamente studiato nel contesto della segnalazione mediata dai lipidi, del controllo di qualità degli organelli e della modulazione, guidata dagli sfingolipidi, delle decisioni sul destino cellulare.
Acid Ceramidase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ASAH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ASAH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ASAH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ASAH1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.