ACBP Plasmide Double Nickase (h): sc-402557-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ACBP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ACBP Double Nickase Plasmid (h) e il ACBP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DBI. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ACBP Antibody (C-9): sc-376853
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ACBP Plasmide Double Nickase (h) | sc-402557-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACBP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402557-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il DBI umano codifica la proteina legante gli acil-CoA (ACBP), un piccolo chaperone lipidico citosolico che si lega agli esteri di acil-CoA a catena lunga e ne tampona la disponibilità per la sintesi lipidica, la β‑ossidazione e il rimodellamento delle membrane. Regolando il traffico degli acil-CoA, ACBP influenza l’omeostasi metabolica, le risposte allo stress del reticolo endoplasmatico (ER) e l’accoppiamento tra metabolismo lipidico e vie di segnalazione che determinano il bilancio energetico cellulare. L’attività di DBI/ACBP è stata studiata in contesti di deregolazione metabolica, biologia delle goccioline lipidiche e programmi di adattamento allo stress, frequentemente alterati in modelli di cancro e di malattie neurodegenerative. In quanto trasportatore multifunzionale di acil-CoA, ACBP rappresenta un nodo sperimentale maneggevole per analizzare come la disponibilità di lipidi riorganizzi fenotipi trascrizionali e a livello di organelli.
ACBP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DBI nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DBI. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DBI. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DBI interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.