ABP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410674-ACT

Il gene umano **AOC1** codifica l’**amine ossidasi rame-dipendente 1** (nota anche come **ABP1/DAO**), un enzima secreto e associato alla membrana che catalizza la **deaminazione ossidativa** di ammine biogene quali **istamina** e **putrescina**, producendo **aldeidi**, **ammoniaca** e **perossido di idrogeno**. Attraverso la regolazione del tono delle ammine extracellulari e la generazione di specie reattive dell’ossigeno, AOC1 influenza la segnalazione infiammatoria, la biologia della barriera epiteliale e le vie sensibili allo stato redox nel microambiente tissutale. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di AOC1 sono state collegate a una deregolazione del metabolismo dell’istamina e delle risposte immunitarie, e sono state studiate in contesti che includono l’infiammazione associata alle allergie, la funzione della mucosa gastrointestinale e la biologia dello stroma associato ai tumori. Queste proprietà rendono AOC1 un bersaglio utile per studi meccanicistici sul catabolismo delle ammine, sullo stress ossidativo e sulla segnalazione cellula–cellula mediata da metaboliti extracellulari.

ABP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di AOC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ABP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus AOC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione AOC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ABP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus AOC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ABP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ABP1 nelle cellule tumorali con espressione di AOC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.