ABCG1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401237

Panoramica

ABCG1 (membro 1 della sottofamiglia G delle cassette di legame dell’ATP) è un trasportatore di efflusso di colesterolo e fosfolipidi che promuove l’esportazione dei lipidi verso le HDL e contribuisce a mantenere la composizione della membrana cellulare e l’omeostasi degli steroli. Agisce a valle della segnalazione LXR/RXR e partecipa alla gestione del colesterolo nei macrofagi, alla dinamica delle goccioline lipidiche e al tono infiammatorio nelle cellule mieloidi. Alterazioni dell’attività di ABCG1 sono state associate a una deregolazione del metabolismo lipidico e all’attivazione delle cellule immunitarie, con implicazioni nella biologia dell’aterosclerosi, nell’infiammazione metabolica e nell’omeostasi del surfattante polmonare. Nei modelli cellulari umani, ABCG1 è spesso studiato per il suo impatto sulla formazione di cellule schiumose, sulle risposte citochiniche e sul cross-talk con trasportatori ABC come ABCA1.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ABCG1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ABCG1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ABCG1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ABCG1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ABCG1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ABCG1 per lo studio della segnalazione di ABCG1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ABCG1 critici per la funzione di ABCG1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ABCG1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ABCG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ABCG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ABCG1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ABCG1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ABCG1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ABCG1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ABCG1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.