ABCA4 Plasmide Double Nickase (h): sc-401830-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ABCA4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ABCA4 Double Nickase Plasmid (h) e il ABCA4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ABCA4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ABCA4 Antibody (3F4): sc-65672
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ABCA4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401830-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ABCA4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401830-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCA4 codifica un trasportatore della famiglia ATP-binding cassette localizzato prevalentemente nelle membrane dei dischi del segmento esterno dei fotorecettori, dove funziona come flippasi ATP-dipendente per fosfolipidi derivati dai retinoidi. Facilitando la rimozione della N-retinilidene-fosfatidiletanolammina e di precursori bisretinoidi correlati, ABCA4 sostiene il ciclo visivo (dei retinoidi) e protegge le cellule dallo stress foto-ossidativo. L’alterazione dell’attività di ABCA4 compromette la gestione della retinaldeide e favorisce l’accumulo di fluorofori tossici della lipofuscina nell’epitelio pigmentato retinico. Le varianti di ABCA4 sono fortemente associate a degenerazioni retiniche ereditarie, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici sul metabolismo dei fotorecettori e sulle vie cellulari di risposta allo stress.
ABCA4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ABCA4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ABCA4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ABCA4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ABCA4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.