ABCA13 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407004-ACT

ABCA13 codifica un grande trasportatore della famiglia ATP-binding cassette (ABC), implicato nella traslocazione di lipidi ATP-dipendente attraverso le membrane cellulari, contribuendo all’organizzazione delle membrane e al traffico intracellulare. In quanto membro della sottofamiglia ABCA, ABCA13 è collegato a processi di gestione di lipidi e colesterolo che possono influenzare il trasporto vescicolare, la dinamica endosoma–lisosoma e l’omeostasi delle cellule epiteliali. Un’alterata espressione di ABCA13 è stata riportata in ambito di biologia polmonare ed è stata associata a dataset relativi a tumori e disturbi neuropsichiatrici, stimolando studi su come il rimodellamento lipidico guidato dai trasportatori influenzi la segnalazione e la differenziazione cellulare. Queste caratteristiche rendono ABCA13 un bersaglio utile per investigare le vie di trasporto lipidico, la segnalazione dipendente dalla composizione di membrana e programmi trascrizionali rilevanti per la malattia in modelli cellulari umani.

ABCA13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ABCA13 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ABCA13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ABCA13 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ABCA13, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ABCA13. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ABCA13 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ABCA13 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ABCA13 nelle cellule tumorali con espressione di ABCA13 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.