ABAT Plasmide Double Nickase (h): sc-404041-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ABAT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ABAT Double Nickase Plasmid (h) e il ABAT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ABAT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ABAT Antibody (B-12): sc-393769
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ABAT Plasmide Double Nickase (h) | sc-404041-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ABAT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404041-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABAT umano codifica la 4-aminobutirrato aminotransferasi (GABA transaminasi), un enzima mitocondriale dipendente dal fosfato di piridossale che catalizza il catabolismo del GABA a semialdeide succinica, collegando il turnover del neurotrasmettitore al ciclo dell’acido tricarbossilico tramite lo shunt del GABA. Regolando i livelli intracellulari di GABA e i conseguenti flussi redox e metabolici, ABAT influenza l’eccitabilità neuronale, l’omeostasi mitocondriale e l’equilibrio energetico cellulare. Alterazioni dell’attività di ABAT sono associate a una trasmissione inibitoria modificata e a stress metabolico, e ABAT è stato studiato nel contesto di fenotipi neuroevolutivi e legati alle crisi epilettiche, oltre che di disfunzioni mitocondriali più ampie. Queste caratteristiche rendono ABAT un bersaglio utile per indagare il metabolismo GABAergico, le vie mitocondriali e le relazioni genotipo–fenotipo in modelli cellulari umani.
ABAT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ABAT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ABAT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ABAT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ABAT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.