A20/TNFAIP3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400447-LAC

TNFAIP3 codifica A20, un enzima “ubiquitin-editing” a dita di zinco che funge da regolatore negativo centrale della segnalazione infiammatoria. A20 termina l’attivazione di NF-κB a valle del recettore del TNF, dei recettori Toll-like e delle vie del recettore dell’IL-1 modulando catene di ubiquitina legate K63 e M1 e promuovendo il turnover proteasomiale di proteine adattatrici chiave. Attraverso queste azioni, A20 limita la produzione di citochine, la segnalazione di sopravvivenza cellulare e l’attivazione dell’immunità innata, contribuendo a mantenere l’omeostasi tissutale. Un’espressione o una funzione deregolata di TNFAIP3 è associata a risposte immunitarie aberranti ed è stata implicata nei meccanismi di malattie autoimmuni e infiammatorie, nonché in specifiche dipendenze di segnalazione in alcune neoplasie.

Le particelle di attivazione lentivirale A20/TNFAIP3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TNFAIP3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale A20/TNFAIP3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TNFAIP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di A20/TNFAIP3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TNFAIP3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.