53BP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403004-ACT

TP53BP2 codifica 53BP2 (nota anche come ASPP2), un adattatore multifunzionale che modula programmi trascrizionali che governano il controllo del ciclo cellulare, l’apoptosi e le risposte allo stress attraverso interazioni con proteine della famiglia p53 e con ulteriori partner di segnalazione. 53BP2 contribuisce alla regolazione dei checkpoint associati al danno al DNA e influenza la dinamica del citoscheletro e delle giunzioni, con possibili effetti sulla polarità cellulare e sulla migrazione. La disregolazione dell’espressione di TP53BP2 o delle sue reti di interazione è stata associata, in diversi contesti oncologici, a un’alterata competenza apoptotica e alla segnalazione delle vie oncosoppressorie. In quanto regolatore nodale della trascrizione dipendente da p53, TP53BP2 è frequentemente studiato per chiarire i meccanismi di stabilità del genoma, morte cellulare programmata e trasformazione oncogenica.

53BP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TP53BP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

53BP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TP53BP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TP53BP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di 53BP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TP53BP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da 53BP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via 53BP2 nelle cellule tumorali con espressione di TP53BP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.