5α-Reductase 1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402151-ACT

SRD5A1 codifica la 5α-reduttasi 1 umana, un ossidoreduttasi microsomiale dipendente da NADPH che catalizza la conversione del testosterone nel più potente androgeno diidrotestosterone (DHT). Questo passaggio enzimatico è centrale nel metabolismo degli ormoni steroidei e nella segnalazione del recettore degli androgeni, influenzando programmi trascrizionali che regolano proliferazione, differenziamento e omeostasi lipidica nei tessuti responsivi agli androgeni. L’attività di SRD5A1 è implicata nella regolazione endocrina ed è stata associata alla biologia di patologie guidate dagli androgeni, incluse alterazioni del flusso steroidogenico nei tumori ormono‑responsivi e condizioni dermatologiche. In quanto enzima associato alla membrana del reticolo endoplasmatico, la 5α-reduttasi 1 rappresenta anche un nodo sperimentale utile per indagare il crosstalk tra biosintesi degli steroidi, segnalazione dei recettori nucleari e metabolismo cellulare.

5α-Reductase 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SRD5A1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

5α-Reductase 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SRD5A1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SRD5A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di 5α-Reductase 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SRD5A1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da 5α-Reductase 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via 5α-Reductase 1 nelle cellule tumorali con espressione di SRD5A1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.