4.1N Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420184

Panoramica

Epb41l1 codifica la proteina 4.1N, un membro della famiglia delle proteine 4.1 arricchito nei neuroni, che collega la rete corticale actina/spettina alla membrana plasmatica per stabilizzare la forma cellulare e le proprietà meccaniche della membrana. La 4.1N funziona come fattore di impalcatura (scaffold) nelle membrane e nelle sinapsi neuronali, coordinando l’assemblaggio di complessi proteici che influenzano la crescita dei neuriti, l’organizzazione sinaptica e il traffico vescicolare. Attraverso questi ruoli di accoppiamento tra citoscheletro e membrana, Epb41l1 contribuisce a processi quali la guida assonale e il rimodellamento dipendente dall’attività, centrali per lo sviluppo e la plasticità del sistema nervoso. La disregolazione dell’architettura membrana–citoscheletro associata a 4.1N è rilevante negli studi sui meccanismi neuroevolutivi e neurodegenerativi, in cui connettività neuronale ed eccitabilità alterate rappresentano fenotipi cellulari chiave.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO 4.1N (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Epb41l1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Epb41l1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Epb41l1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina 4.1N.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Epb41l1 per lo studio della segnalazione di 4.1N, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Epb41l1 critici per la funzione di 4.1N
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Epb41l1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal 4.1N CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal 4.1N CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Epb41l1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal 4.1N Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR 4.1N (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Epb41l1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Epb41l1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.