Plasmide CRISPR d'Activation (h) 17β-HSD7: sc-409942-ACT

HSD17B7 code la 17β‑HSD7, une oxydoréductase associée aux membranes qui catalyse des étapes clés du métabolisme des stérols, notamment la conversion de l’estrone en estradiol et des réactions de réduction dans la voie de biosynthèse du cholestérol. En reliant une chimie d’oxydo‑réduction dépendante du NAD(P)H à l’interconversion des hormones stéroïdiennes et à l’homéostasie lipidique, la 17β‑HSD7 influence la prolifération et la différenciation cellulaires, ainsi que la biogenèse membranaire. Son activité s’inscrit à l’interface entre la signalisation endocrine et les processus de biosynthèse du mévalonate/des stérols qui façonnent l’état métabolique et les programmes d’expression génique. Une expression dérégulée de HSD17B7 ou une altération des flux de stéroïdes/stérols ont été associées à des contextes de maladies métaboliques et hormonodépendantes, ce qui étaye son intérêt comme nœud mécanistique dans les études du métabolisme des stéroïdes et de la signalisation régulée par les lipides.

17β-HSD7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HSD17B7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

17β-HSD7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HSD17B7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HSD17B7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 17β-HSD7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HSD17B7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 17β-HSD7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 17β-HSD7 dans les cellules tumorales présentant une expression de HSD17B7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.