17β-HSD7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409942-ACT

HSD17B7 codifica per la 17β-HSD7, un ossidoreduttasi associata alle membrane che catalizza passaggi chiave del metabolismo degli steroli, inclusa la conversione dell’estrone in estradiolo e reazioni di riduzione nella via di biosintesi del colesterolo. Collegando la chimica redox dipendente da NAD(P)H all’interconversione degli ormoni steroidei e all’omeostasi lipidica, la 17β-HSD7 influenza la proliferazione e la differenziazione cellulare, nonché la biogenesi delle membrane. La sua attività si interseca con la segnalazione endocrina e con i processi biosintetici del mevalonato/degli steroli che plasmano lo stato metabolico e i programmi di espressione genica. Un’espressione deregolata di HSD17B7 o un flusso alterato di steroidi/steroli è stato associato a contesti di malattie metaboliche e ormono-dipendenti, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico negli studi sul metabolismo degli steroidi e sulla segnalazione regolata dai lipidi.

17β-HSD7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HSD17B7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

17β-HSD7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HSD17B7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HSD17B7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di 17β-HSD7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HSD17B7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da 17β-HSD7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via 17β-HSD7 nelle cellule tumorali con espressione di HSD17B7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.