17β-HSD3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403863-ACT

HSD17B3 codifica la 17β-HSD3, un’ossidoreduttasi microsomiale che catalizza la conversione NADPH-dipendente dell’androstenedione in testosterone, un passaggio chiave nella biosintesi degli androgeni. Questo enzima opera principalmente nei tessuti steroidogenici e contribuisce a regolare gli output della segnalazione del recettore degli androgeni che influenzano lo sviluppo sessuale e la fisiologia riproduttiva. Un’alterazione dell’attività di HSD17B3 perturba l’omeostasi degli ormoni steroidei ed è stata associata a disturbi dello sviluppo sessuale e a una più ampia disregolazione endocrina. Nei sistemi sperimentali, HSD17B3 rappresenta un nodo maneggevole per studiare il metabolismo degli steroidi, la produzione intracrina di androgeni e il crosstalk tra vie steroidogeniche e programmi trascrizionali.

17β-HSD3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HSD17B3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

17β-HSD3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HSD17B3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HSD17B3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di 17β-HSD3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HSD17B3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da 17β-HSD3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via 17β-HSD3 nelle cellule tumorali con espressione di HSD17B3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.