17β-HSD13 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-415608-ACT

HSD17B13 codifica la 17β-HSD13, un membro arricchito nel fegato della famiglia delle idrossisteroide 17β-deidrogenasi, implicato nel metabolismo dei lipidi cellulari e nella trasformazione di steroidi/retinoidi dipendente dallo stato redox. La proteina si localizza prevalentemente nelle goccioline lipidiche degli epatociti ed è associata alla regolazione dell’omeostasi delle goccioline lipidiche, alla gestione degli acidi grassi e alle risposte allo stress metabolico nelle vie epatiche. Studi genetici e di espressione collegano HSD17B13 alla suscettibilità e alla progressione di fenotipi di malattia epatica, inclusi il danno correlato alla steatosi e condizioni infiammatorie del fegato. Di conseguenza, HSD17B13 rappresenta un punto di ingresso funzionale per studi meccanicistici che connettono metabolismo epatico, dinamiche di accumulo lipidico e stati cellulari rilevanti per la patologia epatica.

17β-HSD13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HSD17B13 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

17β-HSD13 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HSD17B13 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HSD17B13, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di 17β-HSD13. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HSD17B13 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da 17β-HSD13 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via 17β-HSD13 nelle cellule tumorali con espressione di HSD17B13 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.