μ-protocadherin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406015

Panoramica

CDHR5 codifica la μ-protocaderina, una molecola di adesione cellula-cellula calcio-dipendente arricchita nei tessuti epiteliali, dove contribuisce all’organizzazione delle giunzioni apicali, al mantenimento della polarità e all’integrità della barriera. Attraverso interazioni omofiliche e il collegamento a complessi citoscheletrici e giunzionali, la μ-protocaderina aiuta a coordinare la morfogenesi epiteliale e la segnalazione dipendente dal contatto, che influenza la differenziazione e l’architettura tissutale. Un’alterata espressione di CDHR5 è stata associata al rimodellamento epiteliale e a programmi di adesione deregolati osservati in patologie gastrointestinali e in altre patologie epiteliali. In quanto recettore di adesione di superficie, CDHR5 è spesso analizzato in studi sulla stabilità delle giunzioni, sulla plasticità epiteliale e su fenotipi dipendenti dal microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO μ-protocadherin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDHR5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDHR5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDHR5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina μ-protocadherin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDHR5 per lo studio della segnalazione di μ-protocadherin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDHR5 critici per la funzione di μ-protocadherin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDHR5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal μ-protocadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal μ-protocadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDHR5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal μ-protocadherin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR μ-protocadherin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDHR5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDHR5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.