γS-crystallin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419834

Panoramica

Crygs codifica la γS-cristallina del topo, una proteina strutturale altamente abbondante nel citoplasma del cristallino che contribuisce alla trasparenza e alle proprietà refrattive della lente stabilizzando complessi proteici densamente impacchettati. In quanto membro della superfamiglia delle β/γ-cristalline, la γS-cristallina sostiene l’omeostasi proteica a lungo termine in un ambiente anucleato, in cui alterazioni del ripiegamento, aggregazione o modificazioni post-traduzionali possono compromettere la trasmissione della luce attraverso il cristallino. L’alterazione dell’equilibrio delle cristalline si interseca con le vie della proteostasi, incluse il ripiegamento assistito da chaperoni e le risposte allo stress che influenzano la solubilità delle proteine lungo l’arco della vita. Le perturbazioni genetiche e biochimiche delle cristalline sono ampiamente utilizzate per modellare fenotipi di opacità del cristallino e per studiare i meccanismi alla base dell’aggregazione proteica associata alla cataratta.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO γS-crystallin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Crygs in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Crygs insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Crygs a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina γS-crystallin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Crygs per lo studio della segnalazione di γS-crystallin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Crygs critici per la funzione di γS-crystallin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Crygs per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal γS-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal γS-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Crygs. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal γS-crystallin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR γS-crystallin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Crygs per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Crygs definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.