Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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γ-GCSc Plasmide Double Nickase (m): sc-420573-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- γ-GCSc Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il γ-GCSc Double Nickase Plasmid (m) e il γ-GCSc Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Gclc. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: γ-GCSc Antibody (H-5): sc-390811
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
γ-GCSc Plasmide Double Nickase (m) | sc-420573-NIC | 20 µg | $410.00 |
Gclc codifica la subunità catalitica della glutammato–cisteina ligasi (γ-GCSc), l’enzima limitante la velocità nella biosintesi de novo del glutatione. Regolando i livelli cellulari di glutatione, la γ-GCSc influenza l’omeostasi redox, la detossificazione di elettrofili e xenobiotici e il mantenimento della segnalazione dipendente dai tioli. L’attività di Gclc si integra con le reti di risposta allo stress ossidativo, inclusi i programmi antiossidanti regolati da NRF2, e influenza la funzione mitocondriale e la suscettibilità cellulare alle specie reattive dell’ossigeno. Una disregolazione del metabolismo del glutatione e una compromissione della funzione di Gclc sono state associate a fenotipi di danno ossidativo rilevanti per infiammazione, neurodegenerazione, stress metabolico e sensibilità ai tossici in modelli biomedici.
γ-GCSc Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Gclc nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Gclc. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Gclc. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Gclc interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.