γF-crystallin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419833

Panoramica

Crygf codifica la γF-cristallina, una cristallina strutturale altamente abbondante nel cristallino oculare del topo, che contribuisce all’indice di rifrazione, alla trasparenza e alla stabilità a lungo termine delle cellule fibrose. Le γ-cristalline sono caratterizzate da domini a foglietto β strettamente impacchettati, che permettono un’elevata densità proteica riducendo al minimo la diffusione della luce; il loro mantenimento dipende dalle reti di proteostasi del cristallino, incluse le interazioni con chaperoni, l’equilibrio redox e un turnover proteico limitato. Alterazioni della composizione o della solubilità delle cristalline possono compromettere l’architettura del cristallino, favorire l’aggregazione proteica e aumentare la suscettibilità a fenotipi di opacità simil-catarattosa nei modelli sperimentali. Crygf rappresenta quindi un nodo utile per studiare lo sviluppo del cristallino, la differenziazione delle cellule fibrose e i meccanismi di stabilità proteica in un contesto tissutale in gran parte post-mitotico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO γF-crystallin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Crygf in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Crygf insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Crygf a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina γF-crystallin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Crygf per lo studio della segnalazione di γF-crystallin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Crygf critici per la funzione di γF-crystallin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Crygf per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal γF-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal γF-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Crygf. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal γF-crystallin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR γF-crystallin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Crygf per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Crygf definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.