γ Enolase Plasmide Double Nickase (h): sc-400763-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- γ Enolase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il γ Enolase Double Nickase Plasmid (h) e il γ Enolase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ENO2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: γ Enolase Antibody (D-7): sc-376375
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
γ Enolase Plasmide Double Nickase (h) | sc-400763-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
γ Enolase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400763-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ENO2 codifica la γ-enolasi umana (enolasi neuronale specifica, NSE), un enzima glicolitico che catalizza l’interconversione tra 2-fosfoglicerato e fosfoenolpiruvato, collegando il metabolismo del glucosio alla produzione cellulare di ATP. Oltre alla glicolisi, l’espressione di ENO2 è associata alla differenziazione neuronale, all’attività sinaptica e all’adattamento metabolico nei tessuti eccitabili, ed è comunemente utilizzata come marcatore di stati di linea neuroendocrina e neuronale. Alterazioni della regolazione di ENO2 sono state collegate alla riprogrammazione metabolica, alle risposte allo stress ossidativo e a cambiamenti nelle vie di segnalazione della sopravvivenza cellulare osservati in diversi modelli di neurobiologia e oncologia. Queste caratteristiche rendono ENO2 un nodo utile per studiare il flusso glicolitico, la specificazione di linea e i fenotipi associati al metabolismo nelle cellule umane.
γ Enolase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ENO2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ENO2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ENO2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ENO2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.