γ-catenin Plasmide Double Nickase (h): sc-401640-NIC

JUP codifica la γ-catenina umana (plakoglobina), una proteina con ripetizioni armadillo che collega i complessi di adesione delle caderine al citoscheletro di actina e ai filamenti intermedi. Nelle giunzioni aderenti e nei desmosomi, la γ-catenina sostiene l’adesione cellula–cellula, l’integrità dei tessuti e la meccanotrasduzione, e può anche influenzare i programmi trascrizionali associati a Wnt/β-catenina attraverso partner di legame condivisi. Un’espressione alterata di JUP o una sua diversa localizzazione a livello giunzionale è associata a una compromissione della funzione di barriera epiteliale e a cambiamenti nella migrazione e nella differenziazione cellulare, rendendola rilevante per studi di biologia del cancro e di fenotipi cardiocutanei legati alla disfunzione dei desmosomi. Questi ruoli collocano la γ-catenina all’intersezione tra assemblaggio delle giunzioni, organizzazione del citoscheletro e reti di segnalazione che controllano l’omeostasi tissutale.

γ-catenin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus JUP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di JUP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di JUP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con JUP interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.