γB-crystallin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419829

Panoramica

Crygb codifica la γB-cristallina, una cristallina strutturale altamente espressa nel cristallino dell’occhio dei vertebrati, che contribuisce all’indice di rifrazione e alla trasparenza del cristallino a lungo termine. In quanto membro della superfamiglia delle βγ-cristalline, la γB-cristallina partecipa alla fitta rete proteica che mantiene l’architettura delle cellule delle fibre del cristallino e contrasta l’aggregazione in condizioni di stress ossidativo e di altri stress proteotossici. L’alterazione dell’omeostasi delle cristalline è associata a cambiamenti della solubilità proteica, a un’organizzazione compromessa delle cellule delle fibre e a fenotipi di diffusione della luce rilevanti per processi simili alla cataratta. Crygb nel topo rappresenta quindi un utile punto di ingresso genetico per studiare lo sviluppo del cristallino, le vie di proteostasi e i meccanismi di stabilità e comportamento di fase delle cristalline.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO γB-crystallin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Crygb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Crygb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Crygb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina γB-crystallin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Crygb per lo studio della segnalazione di γB-crystallin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Crygb critici per la funzione di γB-crystallin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Crygb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal γB-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal γB-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Crygb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal γB-crystallin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR γB-crystallin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Crygb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Crygb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.