Plasmide Double Nickase (h) γ1-Adaptin: sc-403986-NIC

AP1G1 code la sous-unité γ1-adaptine humaine du complexe adaptateur AP-1, un composant central du trafic vésiculaire dépendant de la clathrine au niveau du réseau trans-golgien et des endosomes. La γ1-adaptine contribue à coupler les signaux de tri des cargos à l’assemblage du manteau de clathrine, favorisant la formation de transporteurs qui régulent le recyclage des récepteurs, l’adressage aux lysosomes et la distribution polarisée des protéines membranaires. Par ses rôles dans le tri endosomal et le transport intracellulaire, AP1G1 influence l’homéostasie des récepteurs de signalisation et la composition membranaire, des processus fréquemment étudiés en neurobiologie, en immunologie et dans les réponses au stress cellulaire. La dérégulation de la fonction des complexes adaptateurs et des voies de trafic endosomal a été associée à des phénotypes développementaux et neurologiques et peut moduler la susceptibilité à l’entrée et à la réplication de pathogènes, ce qui fait d’AP1G1 un nœud pertinent pour la recherche mécanistique sur les voies cellulaires.

γ1-Adaptin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AP1G1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AP1G1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AP1G1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AP1G1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.