γ1-Adaptin Plasmide Double Nickase (h): sc-403986-NIC

AP1G1 codifica la subunità umana γ1-adattina del complesso proteico adattatore AP-1, un componente centrale del traffico vescicolare mediato da clatrina a livello della rete trans-Golgi e degli endosomi. La γ1-adattina contribuisce ad accoppiare i segnali di smistamento del carico all’assemblaggio del rivestimento di clatrina, sostenendo la formazione di vettori di trasporto che regolano il riciclo dei recettori, la consegna ai lisosomi e la distribuzione polarizzata delle proteine di membrana. Attraverso i suoi ruoli nello smistamento endosomiale e nel trasporto intracellulare, AP1G1 influenza l’omeostasi dei recettori di segnalazione e la composizione della membrana, processi frequentemente analizzati negli studi di neurobiologia, immunità e risposte allo stress cellulare. La disregolazione della funzione dei complessi adattatori e delle vie di traffico endosomiale è stata associata a fenotipi dello sviluppo e neurologici e può modulare la suscettibilità all’ingresso e alla replicazione di patogeni, rendendo AP1G1 un nodo utile per la ricerca meccanicistica sulle vie biologiche.

γ1-Adaptin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AP1G1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AP1G1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AP1G1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AP1G1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.