ε Tubulin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405619

Panoramica

TUBE1 codifica l’ε-tubulina, un membro altamente conservato della famiglia delle tubuline, implicato nella biologia dei centrioli e nell’organizzazione basata sui microtubuli. L’ε-tubulina è stata associata alla duplicazione dei centrioli e all’integrità del centrosoma, processi che coordinano l’assemblaggio del fuso mitotico, la segregazione dei cromosomi e la progressione del ciclo cellulare. L’alterazione dell’omeostasi del centrosoma è collegata all’instabilità genomica e a segnali proliferativi modificati, mettendo in relazione le perturbazioni della rete delle tubuline con fenotipi rilevanti per il cancro. In quanto tubulina associata ai centrioli, l’ε-tubulina è anche di interesse per lo studio dei difetti della divisione cellulare e del traffico cellulare dipendente dai microtubuli nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ε Tubulin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TUBE1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TUBE1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TUBE1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ε Tubulin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TUBE1 per lo studio della segnalazione di ε Tubulin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TUBE1 critici per la funzione di ε Tubulin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TUBE1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ε Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ε Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TUBE1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ε Tubulin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ε Tubulin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TUBE1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TUBE1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.