Plasmide CRISPR/Cas9 KO ε Tubulin (h): sc-405619
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- ε Tubulin Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique ε Tubulin, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ε Tubulin Antibody (5F3B7): sc-517236
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO ε Tubulin (h) | sc-405619 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
TUBE1 code l’ε-tubuline, un membre hautement conservé de la famille des tubulines, impliqué dans la biologie des centrioles et l’organisation dépendante des microtubules. L’ε-tubuline a été associée à la duplication des centrioles et à l’intégrité du centrosome, des processus qui coordonnent l’assemblage du fuseau mitotique, la ségrégation des chromosomes et la progression du cycle cellulaire. La perturbation de l’homéostasie du centrosome est liée à l’instabilité génomique et à des signalisations prolifératives altérées, reliant ainsi les perturbations du réseau de tubuline à des phénotypes pertinents en oncologie. En tant que tubuline associée aux centrioles, l’ε-tubuline présente également un intérêt pour l’étude des défauts de division cellulaire et du trafic dépendant des microtubules dans les cellules humaines.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ε Tubulin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TUBE1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TUBE1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TUBE1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ε Tubulin.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TUBE1 pour l'étude de la signalisation de ε Tubulin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de TUBE1 essentiels à la fonction de ε Tubulin
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TUBE1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le ε Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ε Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TUBE1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le ε Tubulin plasmide HDR (h) et le ε Tubulin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TUBE1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TUBE1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.