β ig-h3 Plasmide Double Nickase (m): sc-423369-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- β ig-h3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il β ig-h3 Double Nickase Plasmid (m) e il β ig-h3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Tgfbi. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
β ig-h3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423369-NIC | 20 µg | $410.00 |
Tgfbi codifica β ig-h3 (TGFBI), una proteina secreta della matrice extracellulare indotta dalla segnalazione del TGF-β, che modula l’adesione cellula–matrice, la migrazione e il rimodellamento tissutale attraverso interazioni con integrine e componenti strutturali della matrice. Nei sistemi murini, β ig-h3 contribuisce all’organizzazione della matrice extracellulare, ai processi associati alla riparazione delle ferite e alla regolazione del comportamento delle cellule epiteliali e stromali, collegandosi a vie come la segnalazione delle adesioni focali e le risposte fibrotiche guidate dal TGF-β. Un’alterata espressione di TGFBI o la deposizione di matrice vengono spesso studiate in contesti di rimodellamento patologico, inclusi fenotipi simili alla fibrosi e cambiamenti del microambiente tumorale, in cui la composizione della ECM può influenzare l’invasione e il traffico delle cellule immunitarie. Queste caratteristiche rendono Tgfbi un bersaglio utile per chiarire come le proteine della ECM regolate dal TGF-β plasmino l’architettura tissutale e la meccanobiologia.
β ig-h3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tgfbi nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tgfbi. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tgfbi. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tgfbi interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.