β ig-h3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403770

Panoramica

TGFBI codifica β ig-h3 (TGFBIp), una proteina della matrice extracellulare indotta dalla segnalazione di TGF-β, che si lega a collagene, fibronectina e integrine per regolare l’adesione cellulare, la migrazione e l’organizzazione della matrice. Attraverso il suo ruolo nel rimodellamento della MEC e nella segnalazione mediata dalle integrine, β ig-h3 influenza la transizione epitelio-mesenchimale, la riparazione delle ferite e l’omeostasi tissutale. Alterazioni dell’espressione di TGFBI sono state associate a processi fibrotici e a interazioni tumore–stroma che influenzano l’invasione e il potenziale metastatico. Varianti patogene e una deposizione deregolata di β ig-h3 sono inoltre associate a distrofie stromali corneali e a un’aggregazione proteica aberrante nei tessuti oculari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β ig-h3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TGFBI in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TGFBI insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TGFBI a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β ig-h3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TGFBI per lo studio della segnalazione di β ig-h3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TGFBI critici per la funzione di β ig-h3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TGFBI per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β ig-h3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal β ig-h3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TGFBI. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β ig-h3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR β ig-h3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TGFBI per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TGFBI definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.