β-Gal Plasmide Double Nickase (h): sc-401194-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- β-Gal Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il β-Gal Double Nickase Plasmid (h) e il β-Gal Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GLB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: β-Gal Antibody (B-12): sc-377257
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
β-Gal Plasmide Double Nickase (h) | sc-401194-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β-Gal Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401194-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GLB1 codifica la β-galattosidasi umana (β-Gal), un eso-glicosidasi lisosomiale che idrolizza i residui terminali di β-galattosio dal ganglioside GM1, dalle glicoproteine e dai glicosaminoglicani. Questa attività sostiene il flusso catabolico lisosomiale e il turnover dei glicosfingolipidi, intersecandosi con il traffico endo-lisosomiale, la funzione del sistema autofagia–lisosoma e le vie cellulari di controllo qualità. L’alterazione di GLB1 compromette l’eliminazione dei substrati ed è associata a patologie da accumulo lisosomiale, tra cui la gangliosidosi GM1 e la malattia di Morquio B, rendendolo un gene modello utile per lo studio della disfunzione lisosomiale. GLB1 è quindi spesso studiato nel contesto di risposte allo stress legate alla neurodegenerazione, rimodellamento metabolico e conseguenze cellulari di un’elaborazione dei glicani compromessa.
β-Gal Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GLB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GLB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GLB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GLB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.