β-defensin 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419980

Panoramica

Defb1 codifica la β-defensina 1 del topo, un piccolo peptide antimicrobico cationico prodotto dalle cellule epiteliali e particolarmente abbondante nelle superfici di barriera, come i tratti respiratorio, gastrointestinale e urogenitale. La β-defensina 1 contribuisce alla difesa immunitaria innata attraverso un’attività microbicida diretta e modulando la composizione del microbioma mucosale; inoltre agisce da immunomodulatore, in grado di influenzare il reclutamento leucocitario e la segnalazione citochinica. La sua espressione è associata a programmi di differenziazione epiteliale e a risposte infiammatorie, collegando Defb1 a processi che regolano l’integrità della barriera e le interazioni ospite–patogeno. Un’alterata espressione delle defensine è stata associata, in modelli sperimentali, a una maggiore suscettibilità alle infezioni e a fenotipi di malattia infiammatoria, a supporto della sua rilevanza per studi di immunologia delle mucose e omeostasi epiteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β-defensin 1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Defb1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Defb1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Defb1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β-defensin 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Defb1 per lo studio della segnalazione di β-defensin 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Defb1 critici per la funzione di β-defensin 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Defb1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β-defensin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal β-defensin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Defb1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β-defensin 1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR β-defensin 1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Defb1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Defb1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.