β-defensin 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419980

Descripción general

Defb1 codifica la β-defensina 1 de ratón, un pequeño péptido antimicrobiano catiónico producido por células epiteliales y enriquecido en superficies de barrera como los tractos respiratorio, gastrointestinal y urogenital. La β-defensina 1 contribuye a la defensa inmunitaria innata mediante actividad microbicida directa y al moldear la composición del microbioma mucoso, además de funcionar como inmunomodulador que puede influir en el reclutamiento de leucocitos y la señalización de citocinas. Su expresión está vinculada a programas de diferenciación epitelial y a respuestas inflamatorias, conectando a Defb1 con procesos que regulan la integridad de la barrera y las interacciones huésped–patógeno. La alteración de la expresión de defensinas se ha asociado con susceptibilidad a infecciones y con fenotipos de enfermedad inflamatoria en modelos experimentales, lo que respalda su relevancia para estudios de inmunología mucosa y homeostasis epitelial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO β-defensin 1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Defb1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Defb1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Defb1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína β-defensin 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Defb1 para la investigación de la señalización de β-defensin 1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Defb1 críticos para la función de β-defensin 1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Defb1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido β-defensin 1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido β-defensin 1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Defb1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR β-defensin 1 (m) y el plásmido HDR β-defensin 1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Defb1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Defb1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.