β8 Tubulin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401438

Panoramica

TUBB8 codifica la β8-tubulina, un’isotipo di β-tubulina che polimerizza con l’α-tubulina per formare i microtubuli, sostenendo l’architettura del citoscheletro, il trasporto intracellulare e la dinamica del fuso durante la divisione cellulare. Il rimodellamento dei microtubuli è alla base di processi quali la mitosi, il posizionamento degli organelli e la polarità cellulare, attraverso una regolazione coordinata da parte delle proteine associate ai microtubuli e delle modificazioni post-traduzionali della tubulina. Alterazioni nella composizione degli isotipi di tubulina possono influenzare la stabilità dei microtubuli e la sensibilità agli stress che li colpiscono, collegando la biologia della tubulina a difetti nella segregazione dei cromosomi e nell’omeostasi cellulare. TUBB8 è stato studiato nel contesto di fenotipi riproduttivi e dello sviluppo, in cui l’organizzazione dei microtubuli è cruciale, fornendo un modello per analizzare i contributi specifici degli isotipi alla funzione dei microtubuli.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β8 Tubulin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TUBB8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TUBB8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TUBB8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β8 Tubulin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TUBB8 per lo studio della segnalazione di β8 Tubulin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TUBB8 critici per la funzione di β8 Tubulin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TUBB8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β8 Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal β8 Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TUBB8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β8 Tubulin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR β8 Tubulin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TUBB8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TUBB8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.