β3Gn-T2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406310

Panoramica

B3GNT2 codifica la β3Gn-T2 umana, una β-1,3-N-acetilglucosaminiltransferasi che estende le catene di poli-N-acetil-lattosammina (polyLacNAc) su N- e O-glicani e su alcuni glicolipidi selezionati all’interno dell’apparato di Golgi. Modulando la disponibilità di impalcature glicaniche per ulteriori ramificazioni e modifiche terminali (incluse sialilazione e fucosilazione), la β3Gn-T2 influenza le interazioni con le lectine, l’adesione cellula-cellula e il traffico dei recettori. Questa attività di glicosilazione si inserisce nelle vie di biosintesi dei glicani che determinano la stabilità delle proteine di membrana e la comunicazione con la matrice extracellulare. In letteratura, un’espressione alterata di polyLacNAc e pattern di glicosilazione associati a B3GNT2 sono stati collegati a cambiamenti nel comportamento delle cellule tumorali e nel riconoscimento immunitario, a supporto di studi meccanicistici in modelli di oncologia e immunologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β3Gn-T2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene B3GNT2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del B3GNT2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto B3GNT2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β3Gn-T2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di B3GNT2 per lo studio della segnalazione di β3Gn-T2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni B3GNT2 critici per la funzione di β3Gn-T2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di B3GNT2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal β3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus B3GNT2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β3Gn-T2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR β3Gn-T2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia B3GNT2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio B3GNT2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.