Plásmido CRISPR de Activación (h) β3Gn-T1: sc-411554-ACT

B4GAT1 codifica β3Gn-T1, una glicosiltransferasa que favorece la síntesis y la remodelación de glicoconjugados al catalizar reacciones de transferencia de β1,3‑N‑acetilglucosamina que contribuyen a la elongación de las cadenas de glicanos. A través de su papel en la glicosilación de proteínas y lípidos, β3Gn-T1 influye en el tráfico de membrana, la organización de receptores y las interacciones con la matriz extracelular que moldean la comunicación célula–célula y la señalización dependiente de la adhesión. Los programas de glicosilación alterados que involucran B4GAT1 se han investigado en contextos de regulación del desarrollo y de cambios asociados a enfermedades en la composición de glicanos, donde las variaciones en las glicoproteínas de superficie pueden afectar el reconocimiento inmunitario y las redes de señalización. Estas propiedades convierten a B4GAT1 en una diana útil para estudiar la modulación de vías dependientes de la glicosilación y los fenotipos vinculados a los glicanos de la superficie celular.

β3Gn-T1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de B4GAT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β3Gn-T1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus B4GAT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional B4GAT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β3Gn-T1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo B4GAT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β3Gn-T1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β3Gn-T1 en células tumorales con expresión de B4GAT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.