β2B Tubulin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400059-ACT

TUBB2B codifica a β2B-tubulina humana, um isótipo de β-tubulina enriquecido em neurónios que forma heterodímeros com a α-tubulina para originar microtúbulos que sustentam a arquitetura do citoesqueleto, o transporte intracelular e a dinâmica do fuso mitótico. Em contextos do sistema nervoso em desenvolvimento e maduro, a β2B-tubulina contribui para o crescimento de neuritos, o direcionamento axonal e a migração neuronal através de processos dependentes de microtúbulos e da coordenação com proteínas motoras e proteínas associadas a microtúbulos. A dinâmica dos microtúbulos, regulada pela composição de isótipos de tubulina, cruza-se com vias que controlam a polaridade e a divisão celulares, incluindo a sinalização por GTPases Rho e a organização mediada pelo centrossoma. Variações patogénicas ou a expressão desregulada de TUBB2B têm sido associadas a perturbações do neurodesenvolvimento caracterizadas por organização cortical alterada e diferenciação neuronal comprometida, o que a torna relevante para estudos mecanísticos em modelos neuronais.

β2B Tubulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TUBB2B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β2B Tubulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TUBB2B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TUBB2B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β2B Tubulin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TUBB2B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β2B Tubulin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β2B Tubulin em células tumorais com expressão de TUBB2B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.