β-2-Microglobulin Plasmide Double Nickase (h): sc-417704-NIC

B2M codifica la β2-microglobulina, una componente non covalente dei complessi MHC di classe I, necessaria per il corretto ripiegamento, la stabilità e l’esposizione sulla superficie cellulare delle molecole HLA di classe I. Supportando la presentazione dei peptidi alle cellule T CD8+, la β2-microglobulina influenza le vie di processamento e presentazione dell’antigene e modella la sorveglianza immunitaria e il riconoscimento del sé rispetto al non-sé. Un’alterata espressione di B2M o una perdita di funzione possono compromettere il traffico dell’MHC I e ridurre la presentazione dell’antigene, un fenomeno osservato in molteplici contesti di evasione immunitaria. Queste caratteristiche rendono B2M un marcatore ampiamente utilizzato e un nodo funzionale per studiare la segnalazione dipendente da HLA, i programmi responsivi all’interferone e le interazioni immunità–tumore in modelli cellulari umani.

β-2-Microglobulin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus B2M nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di B2M. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di B2M. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con B2M interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.