β-2-Microglobulin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419281-ACT

B2m codifica a β-2-microglobulina, um componente conservado dos complexos de MHC de classe I, necessário para o correto dobramento, a estabilidade na superfície e a apresentação de peptídeos às células T CD8+. Em células de camundongo, a β-2-microglobulina sustenta vias de processamento e apresentação de antígenos que coordenam a vigilância imunológica, programas gênicos responsivos a interferon e mecanismos de tolerância. Alterações na expressão ou na função de B2m são amplamente usadas como modelo de mudanças na exibição de MHC I que influenciam o reconhecimento imune, a inflamação e as interações hospedeiro–patógeno. Como componente imunológico constitutivo, também é relevante para estudos de biologia de transplantes, interações tumor–sistema imune e fluxos de trabalho de engenharia celular nos quais a modulação de MHC I afeta a compatibilidade imunológica.

β-2-Microglobulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de B2m sem alterar a sequência de ADN subjacente.

β-2-Microglobulin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus B2m em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição B2m, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de β-2-Microglobulin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus B2m nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de β-2-Microglobulin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via β-2-Microglobulin em células tumorais com expressão de B2m silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.