β-2-Microglobulin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417704-ACT

B2M codifica la β-2-microglobulina, una subunità non covalente essenziale delle molecole del complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) di classe I, necessaria per il corretto ripiegamento, la stabilità e l’esposizione sulla superficie cellulare dei complessi peptide–MHC. Sostenendo i processi di elaborazione e presentazione dell’antigene, la β-2-microglobulina contribuisce alle vie di sorveglianza immunitaria che modellano il riconoscimento da parte dei linfociti T citotossici e le interazioni con i recettori inibitori delle cellule NK. Alterazioni dell’espressione o della funzione di B2M vengono spesso esaminate in contesti di evasione immunitaria, stati di segnalazione guidati dall’interferone e difetti di presentazione dell’antigene in diversi modelli tumorali e infiammatori. In quanto componente ampiamente espressa nelle cellule nucleate, B2M è utilizzata anche come indicatore dell’integrità della via dell’MHC I e della regolazione dell’immunopeptidoma.

β-2-Microglobulin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di B2M senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

β-2-Microglobulin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus B2M nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione B2M, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di β-2-Microglobulin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus B2M nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da β-2-Microglobulin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via β-2-Microglobulin nelle cellule tumorali con espressione di B2M silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.