β-1,4-GalNAc-T3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-415306-LAC

B4GALNT3 codifica la β-1,4-GalNAc-T3, una glicosiltransferasi residente nell’apparato di Golgi che trasferisce la N-acetilgalattosamina con un legame β1,4 per generare specifici motivi glicani terminali di tipo LacdiNAc su glicoproteine e glicolipidi. Modellando la ramificazione dei glicani e le loro strutture terminali, la β-1,4-GalNAc-T3 influenza la stabilità proteica, le interazioni recettore–ligando e l’adesione cellula–cellula all’interno della via secretoria e delle più ampie reti di glicosilazione. Un’espressione alterata di B4GALNT3 è stata associata a firme di glicosilazione deregolate osservate in ambito oncologico e in contesti infiammatori, in cui cambiamenti dei glicani di superficie possono modulare la segnalazione e il riconoscimento immunitario. Questo gene è quindi rilevante per studiare la regolazione dipendente dal “glico-codice” del traffico di membrana, delle interazioni con la matrice extracellulare e dell’attività dei recettori in specifiche vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale β-1,4-GalNAc-T3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di B4GALNT3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale β-1,4-GalNAc-T3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione B4GALNT3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di β-1,4-GalNAc-T3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo B4GALNT3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.