Plasmide CRISPR d'Activation (h) β-1,3-Gal-T3: sc-411200-ACT

B3GALNT1 code la β-1,3-Gal-T3 humaine, une glycosyltransférase localisée dans l’appareil de Golgi qui catalyse le transfert de N‑acétylgalactosamine sur des résidus de galactose afin de générer des structures glycanes spécifiques sur les glycolipides et les glycoprotéines. Par son rôle dans la glycosylation, la β-1,3-Gal-T3 influence l’organisation membranaire, le comportement des récepteurs et la communication cellule–cellule, en modulant la reconnaissance et le trafic dépendants des glycannes. Une expression ou une activité altérée de B3GALNT1 peut perturber la biosynthèse des glycosphingolipides et des glycoprotéines, avec des effets en aval sur l’adhérence, la migration et les réseaux de signalisation. Des profils de glycosylation dérégulés impliquant B3GALNT1 ont été étudiés dans des contextes où le remodelage des glycannes est associé à des phénotypes liés aux maladies et à des modifications de biomarqueurs.

β-1,3-Gal-T3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de B3GALNT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

β-1,3-Gal-T3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus B3GALNT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription B3GALNT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de β-1,3-Gal-T3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus B3GALNT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de β-1,3-Gal-T3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie β-1,3-Gal-T3 dans les cellules tumorales présentant une expression de B3GALNT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.