α_2B-AR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403430-ACT

ADRA2B codifica il recettore umano α2B-AR, un recettore adrenergico alfa-2 accoppiato a proteine G che si associa preferenzialmente a Gi/o per inibire l’adenilil ciclasi, ridurre il cAMP intracellulare e modulare la segnalazione a valle dipendente da PKA. L’attivazione del recettore coinvolge anche processi mediati da β-arrestina, l’internalizzazione e la desensibilizzazione del recettore e può influenzare, in modo dipendente dal contesto, l’attività della via MAPK/ERK. α2B-AR contribuisce alla regolazione del rilascio di neurotrasmettitori, del tono della muscolatura liscia vascolare e delle risposte del sistema nervoso simpatico attraverso il rilevamento delle catecolamine. Una segnalazione adrenergica disregolata che coinvolge ADRA2B è stata associata a fenotipi rilevanti per la ricerca cardiovascolare e neurocomportamentale, a supporto del suo studio in modelli di responsività allo stress, regolazione autonomica e bias di segnalazione recettoriale.

α2B-AR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADRA2B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

α2B-AR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADRA2B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADRA2B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di α2B-AR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADRA2B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da α2B-AR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via α2B-AR nelle cellule tumorali con espressione di ADRA2B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.