α_2A-AR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401545-ACT

ADRA2A codifica il recettore adrenergico umano α2A-AR, un recettore accoppiato a Gi/o che modula l’eccitabilità e la secrezione cellulari inibendo l’adenilil ciclasi, riducendo la segnalazione cAMP/PKA e regolando l’attività dei canali ionici. L’attivazione del recettore influenza anche le vie MAPK/ERK e quelle collegate alla β-arrestina, plasmando il rilascio di neurotrasmettitori e la trasmissione sinaptica nel sistema nervoso centrale e periferico. Oltre ai ruoli nella regolazione neuroendocrina e autonomica, la segnalazione di ADRA2A incide su processi metabolici e vascolari attraverso il controllo di circuiti responsivi alle catecolamine. Un’alterata segnalazione dei recettori adrenergici è stata associata a fenotipi neuropsichiatrici e a tratti cardiometabolici, supportandone l’impiego come bersaglio meccanicistico negli studi di farmacologia recettoriale e di trasduzione del segnale.

α2A-AR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADRA2A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

α2A-AR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADRA2A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADRA2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di α2A-AR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADRA2A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da α2A-AR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via α2A-AR nelle cellule tumorali con espressione di ADRA2A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.