α_1B-AR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419020

Panoramica

Adra1b codifica il recettore adrenergico α1B (α1B-AR) del topo, un recettore accoppiato a proteine G che si associa preferenzialmente a Gq/11 per stimolare la segnalazione mediata dalla fosfolipasi Cβ, aumentando il rilascio di Ca2+ mediato da IP3 e l’attivazione della PKC dipendente dal diacilglicerolo. Attraverso queste vie, l’α1B-AR regola il tono della muscolatura liscia, la neurotrasmissione e l’eccitabilità cellulare, e può attivare a valle programmi MAPK/ERK che influenzano l’espressione genica e le risposte adattative. In ambito neurale e cardiovascolare, la segnalazione dei recettori adrenergici si interseca con i circuiti di risposta allo stress e con la regolazione autonomica, collegando Adra1b a fenotipi rilevanti per l’ipertensione, tratti neuropsichiatrici e la disregolazione adrenergica in modelli di malattia. L’analisi della funzione dell’α1B-AR supporta studi meccanicistici sul bias di segnalazione dei GPCR, sul cross-talk tra recettori e sul controllo trascrizionale dipendente dal calcio.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α1B-AR (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adra1b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adra1b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adra1b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α1B-AR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adra1b per lo studio della segnalazione di α1B-AR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adra1b critici per la funzione di α1B-AR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adra1b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α1B-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal α1B-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adra1b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α1B-AR Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR α1B-AR (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adra1b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adra1b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.