α_1B-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419020

Übersicht

Adra1b kodiert den murinen α1B‑AR, einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der bevorzugt an Gq/11 koppelt und dadurch die Phospholipase‑Cβ‑Signalgebung stimuliert, was eine IP3‑vermittelte Ca2+-Freisetzung sowie eine diacylglycerolabhängige PKC‑Aktivierung erhöht. Über diese Signalwege reguliert der α1B‑AR den Tonus glatter Muskulatur, die Neurotransmission und die zelluläre Erregbarkeit und kann nachgeschaltete MAPK/ERK‑Programme aktivieren, die die Genexpression und adaptive Antworten beeinflussen. In neuronalen und kardiovaskulären Kontexten überschneidet sich die Signalgebung adrenerger Rezeptoren mit Stressreaktions‑Schaltkreisen und der autonomen Regulation, wodurch Adra1b mit Phänotypen verknüpft ist, die für Hypertonie, neuropsychiatrische Merkmale und adrenerge Dysregulation in Krankheitsmodellen relevant sind. Die funktionelle Aufklärung des α1B‑AR unterstützt mechanistische Studien zu Bias in der GPCR‑Signalgebung, Rezeptor‑Crosstalk und calciumabhängiger transkriptioneller Kontrolle.

Das α1B-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Adra1b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Adra1b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Adra1b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die α1B-AR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Adra1b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der α1B-AR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Adra1b-Exone abzielen, die für die α1B-AR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Adra1b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom α1B-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom α1B-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Adra1b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das α1B-AR HDR-Plasmid (m) und α1B-AR HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Adra1b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Adra1b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.