α-sarcoglycan Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422904

Descripción general

Sgca codifica la α-sarcoglicana, un componente transmembrana central del complejo de sarcoglicanos dentro del complejo distrofina–glicoproteínas, que estabiliza el sarcolema y favorece la transmisión de fuerza en el músculo esquelético y cardíaco. Al conectar la matriz extracelular con el citoesqueleto, la α-sarcoglicana contribuye a la integridad de la membrana y a la mecanotransducción durante la contracción, y protege las miofibras del daño inducido por la contracción. La alteración de Sgca perturba el ensamblaje del complejo de proteínas asociadas a la distrofina y compromete la estabilidad de las fibras musculares, proporcionando una base molecular para fenotipos tipo distrofia muscular en sistemas modelo. Por ello, Sgca en ratón es un objetivo clave para estudiar la señalización de adhesión sarcolemal, los programas de degeneración/regeneración muscular y las vías posteriores de remodelado inflamatorio y fibrótico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO α-sarcoglycan (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sgca en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sgca junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sgca tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína α-sarcoglycan.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sgca para la investigación de la señalización de α-sarcoglycan, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sgca críticos para la función de α-sarcoglycan
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sgca para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sgca. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR α-sarcoglycan (m) y el plásmido HDR α-sarcoglycan (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sgca para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sgca definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.