α-sarcoglycan Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422904

Panoramica

Sgca codifica l’α-sarcoglicano, una componente transmembrana centrale del complesso dei sarcoglicani all’interno del complesso distrofina–glicoproteine, che stabilizza il sarcolemma e supporta la trasmissione della forza nel muscolo scheletrico e cardiaco. Collegando la matrice extracellulare al citoscheletro, l’α-sarcoglicano contribuisce all’integrità della membrana e alla meccanotrasduzione durante la contrazione e protegge le miofibre dai danni indotti dalla contrazione. L’alterazione di Sgca compromette l’assemblaggio del complesso proteico associato alla distrofina e riduce la stabilità delle fibre muscolari, fornendo una base molecolare per fenotipi simili alla distrofia muscolare nei sistemi modello. Sgca nel topo è quindi un bersaglio chiave per studiare la segnalazione di adesione sarcolemmale, i programmi di degenerazione/rigenerazione muscolare e le vie a valle di rimodellamento infiammatorio e fibrotico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α-sarcoglycan (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sgca in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sgca insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sgca a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α-sarcoglycan.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sgca per lo studio della segnalazione di α-sarcoglycan, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sgca critici per la funzione di α-sarcoglycan
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sgca per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sgca. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α-sarcoglycan Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR α-sarcoglycan (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sgca per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sgca definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.