α Enolase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420178

Panoramica

Eno1 codifica l’α-enolasi, un metalloenzima conservato che catalizza la conversione del 2-fosfoglicerato in fosfoenolpiruvato nella glicolisi, sostenendo la produzione di ATP e il flusso di carbonio in diverse condizioni nutrizionali. Oltre al suo ruolo metabolico canonico, ENO1 contribuisce a una più ampia riprogrammazione metabolica e può influenzare l’equilibrio redox, l’adattamento all’ipossia e le risposte allo stress cellulare attraverso il suo impatto sulla capacità di flusso glicolitico. Alterazioni nell’espressione e nell’attività di ENO1 sono state associate a fenotipi proliferativi e infiammatori, ed è frequentemente studiata in contesti in cui il metabolismo energetico interseca la segnalazione oncogenica e la funzione delle cellule immunitarie. Nei sistemi murini, Eno1 rappresenta un nodo sperimentalmente maneggevole per analizzare i meccanismi legati alla glicolisi che modellano la crescita cellulare, la migrazione e le risposte ai segnali del microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α Enolase (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Eno1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Eno1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Eno1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α Enolase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Eno1 per lo studio della segnalazione di α Enolase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Eno1 critici per la funzione di α Enolase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Eno1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α Enolase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal α Enolase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Eno1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α Enolase Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR α Enolase (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Eno1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Eno1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.