α/β-dystroglycan Plasmide Double Nickase (h): sc-417547-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- α/β-dystroglycan Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il α/β-dystroglycan Double Nickase Plasmid (h) e il α/β-dystroglycan Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DAG1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: α-dystroglycan Antibody (IIH6): sc-53987
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
α/β-dystroglycan Plasmide Double Nickase (h) | sc-417547-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α/β-dystroglycan Plasmide Double Nickase (h2) | sc-417547-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DAG1 codifica la distroglicana, un recettore di superficie cellulare legante la laminina che viene processato post-traduzionalmente in α-distroglicana e β-distroglicana e assemblato nel complesso distrofina–glicoproteine. Questo complesso collega la matrice extracellulare al citoscheletro di actina, sostenendo l’organizzazione della membrana basale, la stabilità di membrana e la meccanotrasduzione nel muscolo scheletrico e in altri tessuti. La funzione della distroglicana è strettamente legata al legame dei ligandi e alla segnalazione nei siti di adesione, in modo dipendente dalla glicosilazione, integrando i segnali della matrice extracellulare con il rimodellamento del citoscheletro. L’alterazione dell’espressione di DAG1 o del processamento/glicosilazione della distroglicana è associata alle distroglicanopatie e a fenotipi neuromuscolari correlati, rendendolo un nodo chiave per lo studio delle interazioni cellula–matrice e dell’integrità tissutale.
α/β-dystroglycan Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DAG1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DAG1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DAG1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DAG1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.